液相色谱仪,从开机到保养全流程覆盖,故障排除也安排得明明白白!看完这篇,实验室小白也能秒变高手……
一、准备工作
仪器自检:开机前检查泵头、检测器、柱温箱是否正常,确认色谱柱安装方向(箭头指向流路方向),避免反接报废!
流动相配制:必须用超纯水+色谱级溶剂!混合后要超声脱气15分钟,防止气泡干扰基线。记得用0.45μm滤膜过滤,杂质会堵柱子!
样品处理:固体样品要溶解过滤,液体样品需离心取上清。进样前用微孔滤膜过滤,避免颗粒物损伤六通阀!
系统冲洗:新装柱子先用10%甲醇水冲洗30分钟,平衡柱压;更换流动相时必须过渡冲洗,防止沉淀析出!
二、操作步骤
开机顺序:先开泵→柱温箱→检测器→工作站,等基线稳定再进样!
参数设置:
流动相比例:梯度洗脱要设置好时间表(比如0-5min 10%乙腈,5-20min 50%乙腈)
流速:常规分析1mL/min,高压泵勿超2mL/min!
检测波长:UV检测器提前做光谱扫描,选最大吸收波长(比如254nm)
进样技巧:用专用进样针抽取20μL样品,缓慢注入进样阀,避免产生气泡!进样后立即启动运行,防止样品扩散!
数据采集:工作站设置好采样间隔和结束时间,保存原始数据,方便后续处理!
三、常见故障排除
压力异常飙升:
泵头滤芯堵塞→拆下用50%甲醇超声清洗10分钟
色谱柱过载→减少进样量或更换更大容量柱子
管路漏液→检查接头是否拧紧,重新涂硅橡胶密封圈
基线波动剧烈:
流动相污染→更换新鲜流动相并冲洗系统
检测器灯老化→更换氘灯(寿命约2000小时)
温度变化→确保实验室恒温(25±2℃)
峰形分裂/拖尾:
柱头污染→用10倍柱体积的10%甲醇冲洗
样品过载→稀释样品或增加进样体积
柱效下降→考虑更换色谱柱(通常寿命1-2年)
四、清洗与维护
每日保养:
流动相瓶加盖防尘,避免微生物滋生
泵头用注射器注入异丙醇清洗,防止盐析结晶
检测器流通池用超纯水冲洗,避免残留样品
每周深度清洁:
用90%甲醇冲洗系统2小时,去除盐类和蛋白质
拆卸单向阀超声清洗(注意装配方向!)
检查并润滑泵头密封圈,防止磨损漏液
长期停用维护:
色谱柱两端用甲醇封存,避免干燥开裂
泵头注入1%甲醇水防菌,防止长霉堵塞管路
工作站备份数据,防止丢失实验记录
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